dr inż. Dorota Piłakowska-Pietras, mgr inż. Karolina Baszak

HPLC (ang. High Performance Liquid Chromatography) – to rodzaj cieczowej chromatografii kolumnowej.

Jest to technika rozdziału powszechnie stosowana w chemii analitycznej do badania czystości oraz identyfikacji różnych związków chemicznych. HPLC może być też używane jako technika preparatywna do izolacji oraz oczyszczania.

HPLC różni się od kolumnowej chromatografii cieczowej ciśnieniem w układzie podczas analizy. Ciśnienie to jest efektem kilku czynników, m.in. budowy pomp HPLC, uziarnienia, wypełnienia kolumn czy przepływu fazy ruchomej. Dzięki tym parametrom uzyskuje się wyższą sprawność i rozdzielczość układu HPLC, a także skrócenie czasu analizy, szybszy rozdział analizowanych mieszanin na poszczególne związki chemiczne, mniejsze zużycie eluentów, mniejszą ilość analizowanej próbki niż w klasycznej chromatografii kolumnowej.

W ostatnich latach obserwuje się rozwój techniki UHPLC. Jedną z najwyraźniejszych różnic między HPLC i UHPLC są wyższe poziomy ciśnienia przy pracy UHPLC. Używane są kolumny o mniejszych rozmiarach oraz mniejszym uziarnieniu wypełnienia. Dzięki temu uzyskuję się większą sprawność układu chromatograficznego. UHPLC może być stosowany do bardziej skomplikowanych próbek, które mogą mieć mniejsze zawartości różnych składników.

W celu jakościowego oraz ilościowego oznaczenia związków rozdzielanych na kolumnie, wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) wymaga użycia odpowiedniego detektora. Przy czym żaden pojedynczy detektor nie jest w stanie skutecznie wykryć wszystkich związków lub analitów. Wybór odpowiedniego detektora HPLC zależy od konkretnych związków będących przedmiotem zainteresowania.

Najczęściej wykorzystywanym detektorem w HPLC jest detektor spektrofotometryczny UV-Vis. Detektor ten umożliwia pomiar absorbcji światła przez związki chemiczne, co pozwala na identyfikację i analizę ilościową. Detektor matrycy diodowej (DAD), czasami nazywany detektorem matrycy fotodiod (PDA), jest wszechstronnym narzędziem do detekcji w układzie HPLC. Innym stosowanym detektorem jest detektor fluorescencyjny FLD, który działa poprzez pomiar emisji światła ze wzbudzonych atomów w analicie. Wyróżnia się on wyjątkową czułością i specyficznością w porównaniu z detektorem UV-Vis.

Chromatografia cieczowa jest szeroko wykorzystywana w analizach produktów spożywczych, kosmetycznych, leków, suplementów diety oraz z zakresu chemii gospodarczej, przemysłowej oraz biobójczej. Analizy tego typu pod kątem jakościowym i ilościowym obejmują takie związki jak witaminy rozpuszczalne w tłuszczach (na przykład tokoferole, witamina D) oraz witaminy rozpuszczalne w wodzie (na przykład witamina C, witaminy z grupy B). Za pomocą tej techniki bada się zawartość substancji czynnych zawartych w lekach, dzięki czemu możliwa jest ocena i weryfikacja składu produktu. W przypadku produktów kosmetycznych bada się między innymi zawartość konserwantów, bądź filtrów UV, zaś w produktach biobójczych oznacza się zawartość substancji aktywnych, odpowiedzialnych za działanie danego preparatu.

We Wrocławskim Parku Technologicznym analizy wykonywane są na wysokiej klasy aparaturze firmy WATERS, z wytrzymałym i niezawodnym systemem Acquity ARC HPLC/UHPLC. System ten zapewnia wysoką wydajność separacji i jakość danych. Istnieje przy tym możliwość przenoszenia metod z innych platform HPLC bez pogarszania jakości danych, zachowując czas retencji analitu i powtarzalność analiz.

Zainstalowany system Empower Chromatography Data System (CDS), ułatwia przeglądanie danych i gwarantuje ich najwyższą jakość. Chromatograf wyposażony jest w dwa detektory analityczne o wysokiej wydajności: detektor z układem fotodiod PDA oraz detektor fluorescencyjny FLD. Aparat charakteryzuje się precyzyjnym i dokładnym mieszaniem maksymalnie czterech eluentów, z automatyczną kompensacją ściśliwości rozpuszczalnika. Odpowiednie kondycjonowanie kolumn w środowisku o stabilnej temperaturze, zapewnia powtarzalność stosowanych metod. W chromatografie zainstalowana jest zaawansowana konstrukcja igły przepływowej dzięki czemu minimalizowane jest jej zabrudzenie, poprzez ciągłe czyszczenie igły podczas cyklu. Dodatkowym atutem aparatu jest konfigurowalne przez użytkownika ustawienia umożliwiające np. analizę próbek o zwiąkszonej lepkości. Ponadto chromatograf charakteryzuje zintegrowane odgazowanie rozpuszczalnika, mycie uszczelek, a ścieżka przepływu eluentu zaprojektowana jest w sposób, który zmniejsza zatykanie aparatu, związane ze stosowaniem buforów o wysokiej zawartości soli.

Oferta usług laboratoryjnych WPT zawiera badania i analizy z zakresu m.in.:

• fizykochemii,
• analityki jakościowej i ilościowej,
• chemii organicznej
• szkoleń specjalistycznych

W przypadku zainteresowania zapraszamy do kontaktu, by wspólnie wypracować najkorzystniejszą ofertę. Czekamy pod adresem laboratoria@technologpark.pl